流式细胞术

流式细胞术是一种用激光快速激活混悬液中细胞上荧光标记偶联抗体的高通量、单细胞分析技术。该技术是一种强大工具，因为它可以对单个细胞测量多种参数，以及从数百万个细胞快速采集信息。在流式细胞术中，使单细胞悬液穿过单束或多束激光，这引起光发生散射。可以根据光散射分选细胞群体，其中前向散射提供细胞大小分析而侧向散射确定细胞粒度。流式细胞术可提供关于细胞大小和体积的信息、评估已分离细胞亚群的纯度、表征异质细胞群体中不同的细胞类型，同时提供一项可以检查细胞表面蛋白表达和胞内蛋白质表达的技术。

荧光团化合物（例如荧光标记的抗体或碘化丙啶）通常用于流式细胞术中检测目的蛋白。使用具有非重叠最大发射光谱的荧光团使得同时独立检测荧光染色的细胞成为可能。使用同种型对照抗体作为阴性对照来验证流式细胞术实验。多个研究领域，包括癌症生物学、免疫学、传染病监测、病毒学和分子生物学，利用流式细胞术。

什么是 FACS？

荧光激活细胞分选法 (FACS) 是一种专用类型流式细胞术。它提供一种将生物细胞异质混合物分选入多个单独容器的方法，一次一个细胞。细胞分选基于每个细胞的特定光散射特征和荧光特征。

流式细胞术所需的最少细胞数目是多少？

具体实验所需的细胞数目取决于您的需求。与稀疏表达的蛋白质相比，如果您正在探测稳健表达的抗原，则您会需要较少细胞。此外，相对于单色染色，您会需要更多细胞用于多色流式细胞术。但是，我们建议从每管 1 × 10⁶ 个细胞/100 µl 染色缓冲液开始。

流式细胞术中使用哪些对照？

流式细胞术对照分为以下类别。

1.  仪器对照：应在使用前运行来自仪器制造商的校准颗粒或荧光珠，以确保仪器一直表现正常。
2. 补偿对照：进行多色流式细胞术时，来自所用不同荧光团的发射光谱可能重叠，并且可能扩散入多个信道。纠正溢出的过程称为补偿。为了补偿，实验中需要来自每种荧光色素的单份已染色样本。可以使用细胞、补偿珠或抗体捕获珠设置这些样本。
3. 门控对照：分析流式细胞术数据的最重要方面之一是正确设门。荧光减一 (FMO) 对照系解读流式数据和设门所必需。由于 FMO 对照在多色流式实验中提供可靠的背景评估，因此这些对照可以准确地区分阴性细胞群体和阳性细胞群体。
4. 细胞活力对照：死细胞可能产生假阳性,原因是它们自发荧光并且显示非特异性抗体结合的亲和力升高。因此，这些死细胞需要从数据分析中消除。可以使用数种荧光染料（如 7-AAD、Calcein AM 和碘化丙啶）区分死细胞与活细胞。
5. 未染色细胞对照：几种细胞组分如黄素辅酶和 NADPH 是显示自发荧光的内源性荧光团。借助流式细胞术运行未染色细胞的样本将允许您确定因自发荧光所致背景荧光的量，从而您可以适当地门控。
6. 同种型对照：同种型对照用于评估因抗体类别所致的非特异性结合。同种型对照是这样一种抗体，它对目的靶标缺乏特异性，但匹配一抗的类别、类型和荧光偶联物。

用于分化和扩充细胞的产品

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资源

• 用于免疫细胞疗法的抗体
• B 细胞手册
• CD4+ T 细胞亚群手册
• 用于表征人类免疫细胞的细胞标志物指南